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一文带您详细了解快速半干转膜液

发布时间: 2021-08-13  点击次数: 87次
   快速半干转膜液也称为快速半干转缓冲液,是5x体系,稀释成1x 后使用,用于电泳后的转膜实验,搭配快速半干转仪器使用,它是使用是按照1:1:3=5x快转缓冲液:无水乙醇:去离子水的比例稀释成1x备用;使用枪头盒大小的容器浸泡滤纸时,每两张超厚滤纸可取15ml 5x原液稀释成75ml的1x快速半干转缓冲液使用。
  每块小型凝胶取两张超厚滤纸(约7.5x10cm大小,单张约2.4mm厚,也可用其他厚度规格堆叠成类似厚度)充分浸泡转印缓冲液10分钟;快速转膜缓冲液(10×)可以高效将凝胶上的蛋白样品转移到膜上,转膜过程中无需额外冰水浴,并且可以同时进行小分子量与大分子量的蛋白转印,无需进行凝胶和膜的裁切,可很大程度上简化实验操作,节约时间和精力。
  快速半干转膜液转膜条件设置是根据实验条件及仪器的不同,转膜条件和结果会有差别。一般转膜电流可设为电泳仪允许的大电流。通常条件下,以1mm厚的 8%分离胶为例,当转膜电流为400mA 时,25min可完成 10~180kD 蛋白 marker的同时转印。如果电泳仪允许,则可在 1350mA 电压条件下,15~40min进行不同分子量大小蛋白的转印。具体转膜条件可根据电泳仪电流限定、凝胶厚度、分离胶浓度、目的蛋白分子量做出适当调整。
  快速半干转膜液在使用时配制好的半干法转膜液可室温或4℃保存。配制好的半干法转膜液长期存放后,如果颜色变成浅棕色或黄褐色,应丢弃。需使用分析纯级别的乙醇或纯度更高的乙醇。

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